沪研病毒检测试剂盒出口30多个国家，有何技术秘诀

　　随着疫情在全球蔓延，新型冠状病毒核酸检测试剂盒的需求量越来越大。近日，上海之江生物科技股份有限公司研发的病毒检测试剂盒（荧光PCR法）获得欧盟CE认证，已出口到意大利、法国、德国、日本、韩国等30多个国家。在武汉“战疫”中，这家企业研发的全自动核酸检测前处理系统和试剂也立下战功，10台仪器每天能完成高达5000人份的样本检测。

　　荧光PCR法检测病毒的科学原理是什么？全自动检测设备为何效率很高？解放日报·上观新闻记者采访了之江生物两位专家。

　　 让微量核酸指数级扩增

　　之江生物研发中心副总监张捷介绍，PCR的意思是聚合酶链式反应，其基本原理是利用双链DNA（脱氧核糖核酸）在高温下解链、在低温下结合的特性，通过控制温度变化来模拟DNA在体内的复制过程。这种技术可以用于测定古生物化石，历史人物遗体，犯罪嫌疑人毛发、皮肤和体液中的DNA，也可用于测定病毒核酸。

　　利用荧光PCR法检测病毒前，科研人员要分析这种病毒的核酸序列，设计出特异性可与病毒核酸结合的引物（20个左右核苷酸组成的寡核苷酸片段）。“开发这种试剂盒的最关键步骤，是找到能与病毒核酸特异性结合的引物。”之江生物董事长邵俊斌博士说，如果引物与目标核酸的结合性差，会影响试剂盒的灵敏度；如果引物还能与其它病原体核酸结合，则会降低试剂盒的特异性。

　　在DNA聚合酶的作用下，引物延伸并与因高温而解链的DNA结合，变成2条链。PCR扩增仪再次调高温度后，DNA再次解链，引物又会延伸并与之结合，变成4条链。如此升温、降温往复进行，病毒中的核酸片段就像孙悟空分身术一样指数级扩增，即片段数量从1变成2、从2变成4、从4变成8……30次循环后，片段的理论数量将达到原先数量的230倍。

　　如何把扩增后的病毒核酸检测出来？这要靠荧光探针（30个左右核苷酸组成的带有荧光报告基团和淬灭基团的寡核苷酸片段）。它与引物一样，也能与病毒核酸结合，未降解前不发光。被扩增的特异性片段越多，被降解的荧光探针也越多，发出的荧光量就越高，从而被仪器检测出来。

　　新冠病毒的核酸是一条单链RNA，与双链DNA病毒相比，更容易发生序列变异。因此在开发试剂盒时，选择靶标除了针对能完全区分新冠病毒和其它病原体的区段外，还需针对序列不易改变的区段设计引物和荧光探针，以避免漏检。